糞便中存在大腸桿菌，故測(cè)定水中的大腸桿菌群數(shù)，可檢驗(yàn)水體是否被糞便污染以及污染的程度。
本實(shí)驗(yàn)用發(fā)酵法測(cè)定大腸桿菌群數(shù)。依據(jù)原理是：大腸桿菌群在37攝氏度生長(zhǎng)時(shí)使乳糖發(fā)酵，其產(chǎn)物在特定培養(yǎng)基上形成黑色化合物。統(tǒng)計(jì)染成黑色的菌群數(shù)，即可計(jì)算水中大腸桿菌群的數(shù)量。
工具與材料
高壓蒸汽滅菌鍋，恒溫培養(yǎng)箱，生物顯微鏡（圖3－1－21－1），載玻片，培養(yǎng)皿，移液管，抽濾瓶，布氏漏斗，醋酸纖維素濾膜，鑷子，酒精燈，錐形瓶。
蛋白胨，乳糖，磷酸氫二鉀，瓊脂，2％伊紅溶液， 0.5％美藍(lán)溶液，5％鹽酸溶液，5％氫氧化鈉溶液。
活動(dòng)過程
1．培養(yǎng)基的配制。
稱取20克瓊脂，加入到900毫升蒸餾水中，加熱溶解，然后加入2克磷酸氫二鉀、10克蛋白胨，攪拌使之充分混合，補(bǔ)充蒸餾水至1000毫升，用鹽酸和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為7.2～7.4。再加入10克乳糖，混勻后分
裝在250毫升的錐形瓶中，在121攝氏度的高溫蒸汽滅菌鍋內(nèi)滅菌15分鐘，貯于冷暗處備用。
2．滅菌。
將培養(yǎng)皿、漏斗、濾膜、抽濾瓶、吸管等放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)滅菌20分鐘。
3．平板培養(yǎng)基的制作。
將貯備的培養(yǎng)基加熱融化，用已滅菌的吸管加入5毫升伊紅溶液和5毫升美藍(lán)溶液，并充分混勻。立即將約15毫升培養(yǎng)基傾入已滅菌的空培養(yǎng)皿中，冷凝待用。
4．將布氏漏斗在抽濾瓶上固定好，用無(wú)菌鑷子夾取醋酸纖維素濾膜邊緣，粗糙面朝上，貼放在布氏漏斗上。
5．把采集的水樣1000毫升倒入布氏漏斗中，將抽濾裝置（圖3－1－21－2）中的緩沖瓶連上抽氣裝置，進(jìn)行抽濾。
6．抽濾結(jié)束后，用鑷子將附有細(xì)菌的濾膜小心取出，放在培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基上，使濾膜與培養(yǎng)基完全緊貼。
7．將培養(yǎng)皿置于37攝氏度恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)，取出后統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)基上呈黑色的菌群數(shù)，填入表3－1－21－1。
說明與延伸
1．整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程必須在無(wú)菌狀態(tài)下操作。
2．培養(yǎng)基的配制可預(yù)先由實(shí)驗(yàn)室完成，學(xué)生可不做這一部分。
表3－1－21－1 水體大腸桿菌群數(shù)測(cè)定報(bào)告
3．每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)以出現(xiàn)30～300個(gè)菌群為準(zhǔn)，若超過300個(gè)，水樣應(yīng)進(jìn)行稀釋。結(jié)果應(yīng)以統(tǒng)計(jì)出的菌群數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。
4．采集水樣時(shí)采樣容器必須充分滅菌。
5．國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，飲用水中總大腸桿菌群必須小于10000個(gè)／升。觀察自來水是否達(dá)到飲用水標(biāo)準(zhǔn)。
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